Contenuto
- Diluizioni Seriali
- Preparazione delle piastre per il calcolo del titolo
- Conteggio e calcolo del titolo del virus
- Avvertenze
Il calcolo del titolo di un virus è un modo complicato per dire che uno scienziato sta contando il numero di virus in un particolare campione. Per calcolare i titoli dei virus, gli scienziati infettano le piastre di batteri in crescita con soluzioni virali a diverse concentrazioni e determinano il numero di virus nella soluzione originale contando i batteri morti a causa dell'infezione virale.
Diluizioni Seriali
Indossare i guanti, riempire 10 provette di coltura con 9 ml di brodo ed etichettarle "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" e così via fino a "10 ^ -10". Queste provette sarà utilizzato per le diluizioni seriali virali utilizzate per calcolare il titolo del fagi. Poiché i virus possono raggiungere concentrazioni incredibilmente elevate, è necessario diluirli per contarli in modo efficace. Ogni provetta rappresenta una diluizione di dieci volte del virus.
Prendi 1 ml di coltura virale per cui vuoi calcolare il titolo del fagi e trasferiscilo nella provetta intitolata "10 ^ -1" con una pipetta. Mescola bene la provetta. Questa è la tua prima diluizione di dieci volte.
Prendi 1 ml della coltura miscelata dalla tua provetta etichettata "10 ^ -1" e trasferiscila con una nuova pipetta nella provetta successiva, etichettata "10 ^ -2". Mescola anche questa provetta.
Continua questo schema per creare una serie di diluizioni seriali. Si finirà con 9 provette da 9 ml e 1 provetta da 10 ml. Le cariche virali nelle tue provette saranno diluite da 10 volte (la tua prima provetta) o 100 volte (la tua seconda provetta) a dieci miliardi di volte (la tua provetta finale).
Preparazione delle piastre per il calcolo del titolo
Prendi 10 provette di triptone agar morbido e 10 piastre di Petri ed etichettale in modo che corrispondano alle provette di diluizione seriale.
Allentare i tappi in modo che non si esplodano nel calore e quindi posizionare i tubi di agar in un becher di acqua bollente. Questo scioglierà l'agar in modo da poterlo versare nelle piastre di Petri.
Trasferisci le tue provette in un set di acqua calda ad almeno 45 gradi Celsius. Questo assicurerà che l'agar non si solidifichi nei tubi prima che tu abbia la possibilità di versarlo in una capsula di Petri.
Aggiungi due gocce di coltura batterica all'agar e mescola delicatamente. Questi sono i batteri che verranno uccisi, permettendoti di contare il numero di particelle virali in una particolare soluzione.
Aggiungere 1 ml di ogni diluizione seriale nella corrispondente provetta di agar mentre le provette sono ancora nel bagno di acqua calda. Ad esempio, 1 ml della vostra diluizione seriale 10 ^ -1 dovrebbe andare nella provetta di agar etichettata "10 ^ -1".
Mescolare ogni provetta e quindi versare ogni provetta nella piastra di Petri con l'etichetta corrispondente. Ciò creerà un sottile strato di agar che è stato inoculato con batteri e virus in ciascuna piastra. Lascia che le piastre crescano durante la notte in un'incubatrice.
Conteggio e calcolo del titolo del virus
Prendi le piastre dall'incubatrice ed esaminale. Dovresti vedere aree nuvolose in tutta la piastra in cui i batteri sono cresciuti, ad eccezione di piccoli punti chiari chiamati placche. Queste placche sono chiazze di batteri morti e ogni placca rappresenta un virus.
Trova un piatto che ha tra 30 e 300 placche e conta il numero esatto di placche su quel piatto.
Prendi il numero di placche sul tuo piatto e moltiplica per 10. Se contassi 157 placche, otterrai 1570.
Moltiplicare il numero ottenuto nel passaggio precedente per l'inverso del numero sulla provetta di diluizione. Ad esempio, se la piastra selezionata era la piastra 10 ^ -5, moltiplicare 1570 per 10 ^ 5 per ottenere 157000000. Questo numero finale è il titolo del fagi e rappresenta il numero di virus per ml della cultura originale.