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Escherichia coli, E. coli, è un batterio che cresce nell'intestino inferiore dei mammiferi. Questo batterio fu scoperto per la prima volta alla fine del 1800. Da allora, ha avuto una lunga storia di utilizzo nella ricerca scientifica. È l'organismo più utilizzato nella genetica molecolare. Parte del motivo per cui E. coli è comunemente usato nella ricerca scientifica è che è facile da coltivare in laboratorio. I fattori che rendono facile la coltivazione di E. coli sono le sue semplici esigenze nutrizionali, il rapido tasso di crescita e i suoi moderati requisiti di manutenzione.
Sterilizzare il circuito di inoculo posizionandolo nella fiamma del bruciatore Bunsen. Passa la metà inferiore del ciclo attraverso la fiamma fino a quando non diventa rossa.
Lasciare raffreddare il circuito. Puoi toccarlo con l'agar sterile sulla piastra per assicurarti che si sia raffreddato. Non posizionare il cappio sul tavolo o lasciarlo in contatto con qualcosa di diverso dall'agar sterile o dalla cultura desiderata ora che è stato sterilizzato.
Immergi il ciclo nella cultura di E. coli e rimuovilo.
Aprire la piastra di agar e far scivolare delicatamente l'anello avanti e indietro sulla superficie di una sezione dell'agar. Fare attenzione a non graffiare l'agar con il passante. L'agar fornisce i nutrienti di cui E. coli ha bisogno per crescere.
Posizionare nuovamente l'anello nella fiamma del bruciatore Bunsen per sterilizzarlo. Una volta che l'asta del circuito si raffredda, toccala su una sezione sterile della piastra per assicurarti che sia fredda, quindi fai scorrere il circuito attraverso la tua prima striscia per creare una seconda striscia. Questa seconda serie è una versione diluita della prima serie. Ripetere questo processo di sterilizzazione e scorrimento fino a quando diverse sezioni della piastra di agar non sono state fatte scivolare. Il motivo per cui lo fai è che puoi scegliere in seguito da singole colonie clonali. Ciò contribuirà ad assicurarti di avere almeno una sezione che abbia singole colonie: non troppo concentrate (che avranno troppa crescita e non ti permetteranno di scegliere da una singola colonia) e non troppo diluite (che non darebbero colonie) .
Sterilizzare l'anello nella fiamma un'ultima volta prima di metterlo da parte nell'area di lavoro.
Riposizionare la parte superiore sulla piastra di agar. Capovolgere la piastra e posizionarla nell'incubatore impostato a 37 gradi Celsius (98,6 gradi Fahrenheit). Questa temperatura ideale di incubazione simula la temperatura del corpo umano in cui risiede E. coli. Entro 24 a 48 ore, appariranno colonie visibili di batteri E. coli nella piastra di agar.