Contenuto
- TL; DR (Too Long; Didnt Read)
- Che cos'è l'elettroforesi?
- Preparazione insoddisfacente del gel
- Troppo campione
- Campione di scarsa qualità
Ti sei mai chiesto come gli scienziati studiano piccoli frammenti come il tuo DNA? Un metodo è l'elettroforesi su gel. Mentre l'elettroforesi di solito produce bande chiare e di facile lettura perfette per l'interpretazione scientifica, i risultati macchiati a volte oscurano i dati.
TL; DR (Too Long; Didnt Read)
L'elettroforesi su gel consente agli scienziati di visualizzare campioni digeriti e misurare le dimensioni dei frammenti. La sbavatura risulta da gel di agarosio preparati in modo improprio, il caricamento di un campione non diluito nei pozzetti o l'utilizzo di campioni di scarsa qualità.
Che cos'è l'elettroforesi?
L'elettroforesi su gel è un modo per gli scienziati di visualizzare campioni digeriti di piccole molecole come il DNA e stimare le dimensioni di quei frammenti. Per eseguire l'elettroforesi, gli scienziati preparano un gel sospendendo l'agarosio in acqua bollente. La polimerizzazione risultante produce polimeri di zucchero incrociati in modo che il gel assomigli un po 'a una ragnatela a livello chimico.
Gli scienziati usano uno strumento di taglio per formare pozzetti nel gel in modo da poter caricare quantità molto piccole di campioni digeriti nei pozzetti. L'accensione della macchina fa scorrere l'elettricità attraverso il gel e i frammenti nei campioni iniziano a spostarsi dai pozzetti verso l'altro lato del gel. Poiché il gel è simile a un nastro, i frammenti più piccoli viaggiano rapidamente attraverso la matrice, mentre i frammenti più grandi impiegano più tempo per arrampicarsi attraverso la matrice. Al termine, il gel contiene bande scure che rappresentano la distanza percorsa dai diversi frammenti. Gli scienziati misurano queste bande e usano un calcolo logaritmico per determinare la dimensione di ciascun frammento in base a quanto è migrato.
Gli scienziati sperano in bande chiare, ma a volte le bande imbrattano. Questa sbavatura di solito è il risultato di gel scarsamente preparati, che caricano campioni non diluiti nei pozzetti o campioni di scarsa qualità.
Preparazione insoddisfacente del gel
Quando si tratta di risultati macchiati, un probabile colpevole è un gel mal preparato. Un gel soddisfacente polimerizza uniformemente, producendo una matrice uniforme in tutto il gel nel vassoio di colata. Se parte del gel - di solito la metà inferiore - si fissa prima che lo scienziato finisca di versare l'intero vassoio, il gel risultante sarà irregolare e produrrà risultati macchiati.
Troppo campione
Prima di caricare i campioni nei pozzetti, questi campioni devono essere sufficientemente diluiti per scorrere attraverso il gel senza traboccare i pozzetti. Se un campione caricato è troppo concentrato perché lo scienziato ha dimenticato di diluirlo o ha utilizzato un fattore di diluizione improprio, i frammenti saranno troppo grandi per i pozzetti e produrranno sbavature.
Campione di scarsa qualità
La sbavatura deriva anche dalla scarsa qualità del campione. Ad esempio, un campione di DNA contaminato con proteine o contenente troppo sale può produrre sbavature. Anche i campioni degradati o denaturati producono scarsi risultati, comprese le bande macchiate.
L'elettroforesi su gel è un modo straordinario per gli scienziati di visualizzare campioni digeriti e determinare la dimensione dei frammenti. Un'attenta preparazione del gel e del campione riduce al minimo la possibilità di sbavature e produce bande chiare ideali per l'interpretazione scientifica.