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La biochimica studia molecole come DNA, RNA e proteine. Le tecniche di assorbimento sono ciò che gli scienziati usano per separare questi tipi di molecole. Nelle cellule esistono come una miscela. La macchia consente ai ricercatori di trovare una proteina tra le tante, come un ago in un pagliaio. La macchia viene generalmente fatta lasciando scorrere una miscela di DNA, RNA o proteine attraverso una lastra di gel. Questo gel consente alle piccole molecole di muoversi più velocemente di quelle più grandi. Le molecole separate vengono quindi premute contro una membrana, il che aiuta a spostare le molecole dal gel sulla membrana. Le molecole si attaccano alla membrana, ma rimangono nella stessa posizione, separate l'una dall'altra, come se fossero ancora nel gel.
Western Blot
Il western blotting è una tecnica comune per separare le proteine per dimensione, ma in colonne diritte. Queste colonne parallele consentono ai ricercatori di confrontare la quantità di una proteina tra diversi campioni che vengono eseguiti uno accanto all'altro, come piste da bowling. Ad esempio, se stavi testando l'effetto di diverse quantità di un farmaco sulla crescita cellulare, tratteresti quattro diversi gruppi di cellule con una diversa quantità di farmaco. Quindi potresti spaccare le cellule ed eseguire le proteine di ciascun gruppo in corsie separate su un gel. Diffondere le proteine in questo modo ti permette di vedere cosa fa una crescente concentrazione di farmaci a una determinata proteina.
Northern Blot
La Northern blotting viene utilizzata per rilevare l'RNA. Le cellule possono essere aperte per liberare il loro RNA. L'RNA di diversi tipi di cellule può essere eseguito su corsie separate su un gel. Il gel diffonde il diverso RNA per dimensione. Queste file ordinate e parallele di RNA consentono a un ricercatore di confrontare quale tipo di cellula ha quanto di quale RNA. Questo metodo consente a un ricercatore di determinare se le cellule di una determinata malattia hanno più di questo RNA o meno di tale RNA. La colorazione settentrionale può rivelare come una malattia sta funzionando a livello della produzione di RNA.
Southern Blot
Il Southern blotting è la tecnica di blotting originale, che ha avviato il sistema di denominazione. È stato inventato da Edwin Southern. La macchia meridionale viene utilizzata per rilevare la quantità di DNA in una miscela. Proprio come con le proteine e l'RNA, il DNA di una cellula può essere rilasciato quando quella cellula viene aperta. La macchia meridionale separa il DNA da diversi tipi di cellule per dimensione. Il DNA di ciascun campione viene distribuito in corsie ordinate e parallele. I singoli pezzi di DNA possono essere rilevati usando una sonda radioattiva o fluorescente, progettata per legarsi solo a quel pezzo di DNA. Il segnale energetico proveniente da una sonda radioattiva o i lampi di luce provenienti da un segnale fluorescente, indicano ai ricercatori la quantità di quel pezzo di DNA presente in ciascun campione.
Altre macchie
Le tre principali tecniche di assorbimento - occidentale, settentrionale e meridionale - sono state modificate in diversi modi per rilevare molecole leggermente diverse. La macchia occidentale contro la macchia meridionale, per esempio. rileva rispettivamente proteine e DNA. Ogni tecnica modificata viene generalmente eseguita nel modo consueto, ma utilizza un metodo diverso per rilevare la molecola che si sta diffondendo nelle corsie parallele. Le macchie sudoccidentali rilevano molecole di proteine attaccate al DNA. Le macchie nordoccidentali rilevano molecole di proteine attaccate all'RNA. Le macchie del Farwestern rilevano molecole di proteine attaccate ad altre proteine.