Le curve di calibrazione vengono utilizzate per determinare la concentrazione di sostanze sconosciute sulla base di misurazioni precedenti di soluzioni di concentrazioni note. La precisione e l'accuratezza delle misurazioni dipendono dalla curva di calibrazione. Migliore è la curva, più precisa è la risposta, peggiore è la curva, maggiore è la precisione. Questo è un tipo di metodo di confronto, l'ignoto viene confrontato con un noto.Le curve di calibrazione vengono utilizzate per tutti i tipi di misurazioni utilizzando molte macchine diverse. Questo esempio usa uno spettrofotometro.
Diluire la soluzione standard a diverse concentrazioni. È tipico fare una diluizione 10 volte, 20 volte diluizione, 30 volte diluizione o qualche altra soluzione saggia. Effettuare ogni diluizione due volte in modo che tutti i campioni siano duplicati.
Calcola le concentrazioni delle soluzioni diluite. Un esempio della nuova concentrazione per la diluizione 10 volte sarebbe la concentrazione della prima soluzione moltiplicata per 0,10.
Leggere l'assorbenza delle soluzioni diluite sullo spettrofotometro. Inserire una cuvetta nello spettrofotometro in modo che il segno del triangolo sia allineato con il percorso della luce. Chiudere il coperchio dello spettrofotometro e premere il pulsante zero. Azzerare la macchina con acqua distillata ogni cinque campioni. Dopo aver azzerato la macchina, leggere i campioni allo stesso modo. L'unica differenza è che premi invio per ottenere l'assorbenza. Premere Invio dopo aver chiuso il coperchio. Registrare questi valori in un blocco note.
Rappresenta graficamente l'assorbenza rispetto alle concentrazioni note calcolate per tutti i campioni. La concentrazione nota sarà sull'asse X e l'assorbenza sull'asse Y. È meglio creare il grafico in un programma di rappresentazione grafica per computer.
Utilizzare il programma di rappresentazione grafica per calcolare la linea di regressione per i punti rappresentati. È possibile eliminare uno dei due punti per ciascuna diluizione per ottenere la migliore linea di regressione. Questo è il punto di fare ogni diluizione in duplicato. Più il valore di R ^ 2 è vicino a uno, migliore è la linea di regressione. Prendi nota dell'equazione della linea di regressione.
Leggere l'assorbenza della soluzione di concentrazione sconosciuta sullo spettrofotometro. Registra questa assorbenza.
Calcola la concentrazione della soluzione sconosciuta usando l'equazione della linea di regressione. L'assorbenza sconosciuta è sostituita da Y nell'equazione. Stai risolvendo l'equazione per X, la concentrazione.