Contenuto
Gli scienziati usano diluizioni seriali (una serie di diluizioni 1:10) per calcolare la densità di popolazione delle colture batteriche. Quando una goccia di coltura contenente un piccolo numero di batteri viene placcata e incubata, ogni cellula teoricamente sarà abbastanza lontana dalle altre cellule da formare la propria colonia. (In realtà, alcune colonie possono essere discendenti di due cellule vicine, ma questo è raro nelle colture diluite, quindi il numero di colonie è una stima molto buona del numero di cellule originariamente trasferite sulla piastra.) Perché la densità della popolazione è sconosciuto, è necessario utilizzare una varietà di diluizioni per finire con una piastra con un numero adeguato di colonie.
Diluizioni Seriali
Etichettare le sei provette (ciascuna contenente 9 mL di terreno di crescita) da 1 a 6. Etichettare le sei piastre di agar da 1 a 6. Utilizzare un pipettatore e puntali sterili per pipetta da 1 millilitro (mL) per trasferire 1 mL di coltura batterica in provetta 1.
Miscelare bene e trasferire 1 ml dalla provetta 1 nella provetta 2 usando un pipettatore e punte sterili da 1 ml.
Ripetere il passaggio 2 per le rimanenti provette, trasferendo ogni volta 1 mL dalla provetta utilizzata più di recente alla provetta successiva.
Utilizzare un pipettatore e punte sterili da 0,1 ml per trasferire 0,1 ml dalla provetta 1 a una piastra di agar. Fiamma un'asta di vetro a forma di L e usala per distribuire uniformemente la goccia attorno alla piastra. Incubare la piastra per 48 ore a una temperatura adeguata per i batteri in uso. Diversi tipi di batteri hanno diverse temperature ottimali di crescita. Se non riesci a trovare la temperatura di crescita ottimale utilizzando il materiale di riferimento, prova a incubare le piastre a 25 e 37 gradi.
Ripetere il passaggio 4, trasferendo ogni volta il liquido da una provetta diversa sulla piastra corrispondente.
Calcoli della popolazione
Osserva le sei piastre e scegli quella con 30-200 colonie isolate.
Moltiplicare il numero di colonie sulla piastra per 10 per calcolare il numero di cellule per ml di coltura dalla provetta di diluizione utilizzata.
Moltiplicare il numero dal passaggio 2 per 10 ^ (numero di piastra) per calcolare il numero di cellule per ml di coltura originale. Il valore di 10 ^ (numero di piastra) è il fattore di diluizione della cultura utilizzata per innocuare quella piastra.